healthy controls
cd19+
positive(n=29)
cd5-cd19+
体外培养表明,cd5+b细胞产生抗体是以igm为主的低亲和性的自身抗体[1]
(n=39)
(department of neurology, the first hospital ,west of china medical university ,chengdu )
negative(n=10)
综上,cd5+b细胞可能与mg发病有关,但与achrab的产生之间无显著相关;可能在achrab阴性mg发病中起作用随着cd5+b细胞功能特性研究的深入,cd5+b细胞在mg发病中的作用机制将会阐明
1.3.2 淋巴细胞准备 无菌条件下取抗凝血采用ficoll密度梯度法分离外周血单个核细胞(pbmc),用rpmi 1640培养液将其调制成1×106 ml-1的细胞悬液
13.±5.76
[2]ragheb s, lisak r p. phenotypic and functional abnormalities of b cell in myastenia gravis. ann n y acad sci, 1993; 681:256
72.33±10.97
9.73±4.57
>0.05
[3]陈 平,徐文桢,龚其美 et al.重症肌无力患者血清sil-2和achrab水平变化的研究.上海免疫学杂志,1995;15(3):138
key words:myasthenia gravis acetylcholine receptor antibody cd5+ b cell flow cytometry
1.1.2 对照组 健康志愿者18例,年龄16～64岁,平均35.3±12.34岁
tab.1 comparison of the percentages of cd5+ ,cd19+,cd5-cd19+,cd5+cd19+ cells in patients with myasthenia gravis and healthy controls(±s,%)
10.56±4.87
[6]braun j, citri y, baltimore d et al. b-ly1 cells: immortal ly-1+ b lymphocyte cell lines spontaneously arising in murine splenic cultures. immunol rev, 1986;93:5
cd5抗原是t细胞上的一种表面标志,然而1980年wang等发现人的b细胞性慢性淋巴细胞性白血病细胞表面有cd5抗原存在,后来研究发现这种cd5+b细胞具有分泌多种自身抗体的功能,与自身免疫病的发病关系密切[1]重症肌无力(myasthenia gravis, mg)是一种自身免疫疾病,抗乙酰胆碱受体抗体(acetylcholine receptor antibody ,achrab)是其主要致病自身抗体,近年来有人发现重症肌无力患者体内cd5+b细胞增多[2]为了探讨cd5+b细胞在mg发病及achrab产生中作用,我们用流式细胞仪分别对achrab阳性和achrab阴性重症肌无力患者周围血中cd5+b细胞百分率进行了测定
cd5+cd19+
单位:韩钊(温州医学院附一院神经科,温州 );徐文桢(华西医大附一院神经科,成都 );刘鸣(华西医大附一院神经科,成都 );魏于全(华西医大肿瘤生物治疗中心,成都 );雷松(华西医大肿瘤生物治疗中心,成都 )
4.12±2.871)
1.3.4 细胞表型分析 在华西医大附一院肿瘤生物治疗中心采用 coulter esp型流式细胞仪每个样品均分析104个细胞,分别检测出cd5+ (全t细胞)、cd19+(全b细胞)、cd5+cd19+(cd5+b细胞)、cd5-cd19+(传统b细胞)的百分率
[1]邱晓彦.b-1细胞研究进展.国外医学·免疫学分册,1996;19(5):235
2.1 mg患者与对照组相比较、全t细胞(cd5+)、 全b细胞(cd19+)、传统b细胞 (cd5-cd19+)的百分率在两组间无显著差别,而cd5+b 细胞(cd5+cd19+)的百分率在mg组高于对照组,有显著差别,p<0.05(见表1,图1)
.)(department of neurology, the first hospital ,west of china medical university ,chengdu )
图1 mg组和对照组cd5+b细胞(cd5+cd19+)的百分率
[4]hayakawa k, hardy r r. normal, autoimmune, and malignant cd5+b cells: the ly-1 b lineage? annu rev immunol, 1988;6: 197
<0.05
xu wen-zhen
13.12±5.86
重症肌无力患者cd5+b细胞的变化
1.3.5 achrab的测定 采用华西医大微生物研究室建立的elisa间接法测定,方法见参考文献[3]
note: 1)p<0.05;2)p<0.05 compared with healthy controls3 讨论
healthy
[5]araga s, kishmoto m, adachi a et al. the cd5+ b cells and myasthenia gravis. autoimmunity, 1995;20(2):129
:韩钊 徐文桢 刘鸣 魏于全 雷松
收稿日期:1999-02-04
1.3.3 免疫荧光染色 取调制好的淋巴细胞悬液20 μl,分别加入配对荧光抗体:fitc-抗cd19/pe-抗cd5、fitc-igg1/pe-igg1(此为空白对照),室温下反应15 min,加入3 ml pbs液(0.01 mol/l,ph7.4)摇匀,1 500 r/min离心3 min,去上清液洗去游离的单抗,加入0.9 ml pbs液,上流式细胞仪在mg患者血清中的achrab是以igg为主的具有高亲和力抗体cd5+b细胞在某些条件下产生抗体的类型可从igm型向igg型转换[4],这样,achrab阳性mg患者中增高数量的cd5+b细胞分泌achrab是有可能的但是,achrab阳性组和achrab阴性组cd5+b细胞无差异,表明achrab的产生与cd5+b细胞无明显相关,araga等的研究表明achrab主要还是由cd5-b细胞产生,而不是由cd5+b细胞产生[5]因此,在achrab阳性mg患者中cd5+b细胞增高与mg发病的确切机制还不清楚cd5+b细胞在mg患者体内增加可能与重症肌无力发病的遗传背景有关braun等认为cd5+b细胞可分泌抗独特型抗体而通过抗独特型网络起免疫调节作用[6],因而,cd5+b细胞在mg的自身免疫反应形成中还可能通过免疫调节机制而起作用
表2 血清achrab阳性mg患者和 achrab阴性mg患者 cd5+、 cd19+、cd5-cd19+、cd5+cd19+细胞百分率的比较(±s,%)
>0.05
p
1.59±0.62
11.24±5.34
1.59±0.62
中国图书分类号 r746.1 r392.11
重症肌无力是一种自身免疫性疾病,尽管其体内存在大量的自身抗体,但直接分泌抗体的b细胞(cd19+)却未见明显增加,本研究及国内外众多学者的报道都证实了这一点但是,表达cd5分子的cd5+b细胞(cd5+cd19+)在mg患者周围血中表现出有意义的增高,本研究的结果发现与raghed 和lisak的报道一致[2]这说明cd5+b细胞与mg的发病可能有关同时,我们还发现achrab阳性和achrab阴性mg患者周围血中cd5+b细胞均明显高于对照组,这一结果表明,cd5+b细胞不仅可能参与了achrab阳性mg的发病,而且可能与achrab阴性的mg发病有关
1.3.1 标本采集 所有研究对象于早上8:00～9:00采集静脉血4 ml分装2管第1管,2 ml edta抗凝,3 h内进行细胞表型分析;第2管,2 ml 不抗凝,分离血清,待测achrab
cd5-cd19+
1.1 研究对象
>0.05
achrab
摘 要 目的:研究cd5+b细胞在重症肌无力(mg)发病中的作用方法:采用免疫荧光双标记技术和流式细胞仪对39例mg患者和18例健康对照者周围血中cd5+细胞(cd5+cd19+)的百分率进行测定,同时用elisa间接法检测mg患者血清中achrab结果:在mg患者周围血cd5+b细胞百分率显著高于对照组,而且在血清achrab阳性和阴性mg中cd5+b细胞均明显高于对照组;但在血清achrab阳性和阴性mg患者之间cd5+b细胞百分率无显著性差异结论:cd5+b细胞与mg发病有关,但与achrab的产生之间无显著相关;可能在血清achrab阴性mg的发病中起作用
fig.1 percentage of cd5+b cells(cd5+cd19+) in the peripheral blood of patients with mg and healthy control(hc)
myasthenia gravis
13.34±5.98
1 材料与方法
abstract;objective:to study the role of cd5+b cells in the pathogenic mechanism of myasthenia gravis(mg).methods: the percentages of cd5+b cell(cd5+cd19+) in 39 patients with mg and 18 healthy control were determined using immunofluorescence double-staining and flow cytometry; the achrab of serum in mg patients were determined by indirect elisa methods.results: the percentages of cd5+ b cell was significant increase in mg patients as compared with healthy controls, moreover, the percentages of cd5+ b cell in serum achrab positive and serum achrab negative mg patients were both higher than that of healthy controls, but the percentages of cd5+ b cell have no significant differ between serum achrab positive and serum achrab negative mg patients.conclusion: cd5+ b cell may play a pathogenic role in the development of mg, there is no significant correlation between achrab production and cd5+ b lymphocytes ; cd5+ b cell might contribute to the pathogenesis of achrab negative mg.
在我们的研究结果中,achrab阴性mg组cd5+b细胞增多,而cd5+b细胞产生的自身抗体又以igm为主,因此,我们推测,mg患者体内数量增多的cd5+b细胞会产生较多igm抗体,通过干扰achr通道中na+内流而导致抗体阴性mg的发病但yamamoto所发现的这种igm因子是否是由cd5+b细胞分泌的自身抗体还需实验证实
16.45±4.46
controls(n=18)
tab.2 comparison of the percentages of cd5+,cd19+,cd5-cd19+,cd5+cd19+ cells in serum achrab positive and serum achrab negative mg patients(±s,%)
68.53±10.12
groups
1.2 试剂 淋巴细胞分离液(上海华精)、rpmi 1640培养液含5%胎牛血清(美国sigma)、achr抗原由华西医大微生物研究室按 monnier法提取、异硫氰酸荧光素( fitc )/藻红蛋白(pe)标记的配对小鼠抗人单克隆抗体: fitc-cd19/pe-cd5、fitc-igg1/pe-igg1(法国国际 immunotech公司)
简介:韩钊,男,31岁,硕士,主治,主要研究神经免疫学;
修改日期:1999-05-20
73.72±10.92
liu ming
关键词:重症肌无力;乙酰胆碱受体抗体;cd5+b细胞;流式细胞仪
(n=18)
1.3 方法
4.05±2.70
cd5+
cd5+cd19+
16.01±6.54
表1 mg患者和健康对照组周围血中cd5+ 、 cd19+、 cd5-cd19+、cd5+cd19+细胞百分率的比较(±s,%)
3.83±1.762)
1.3.6 统计分析 所得数据全部输入微机,建立数据库,采用spss软件,进行t检验
68.53±10.12
参考文献:
70.73±10.87
cd19+
cd5+
achrab
中国免疫学杂志 2000年第3期第16卷 临床免疫学
change of cd5+b cell in patients with myasthenia gravis
2 结果
14.05±5.
1.1.1 mg组 39例mg患者根据典型的临床表现、新斯的明试验、肌电图和血清achrab检查确诊,并排除合并其他免疫性疾病者,抽血前2个月内未应用免疫抑制剂男15例,女24例;年龄5～70岁,平均32.8±13.53岁;病程1月～10年;眼肌型11例,全身型28例;血清achrab阳性29例,achrab阴性10例
16.45±4.46
约有10%～15%的mg患者血清中检测不到achrab,这部分血清抗体阴性的mg是当前mg研究中的热点国内外大量资料表明,这类mg仍可能是自身免疫病,致病因子可能是血浆中非igg部分的某种或多种因子yamamoto等在血清抗体阴性的mg患者的血浆中发现了一种igm因子,可以影响achr通道中na+内流,但不影响钠通道中na+的内流,同时这种igm因子也可出现在部分血清抗体阳性的mg患者的非igg部分,认为这种igm因子可能是导致血清achrab阴性mg发病和疾病严重程度与achrab浓度不相关的原因[7]
(department of neurology, the first hospital, wenzhou medical college, wenzhou )
[7]yomamoto t, vicent a, ciulla t a et al. seronegative myasthenia gravis: a plasma factor inhibiting agonist-induced acetylcholine receptor function copurifies with igm. ann neurol, 1991;30(4):550
han zhao
2.2 血清achrab阳性和achrab阴性mg患者周围血中cd5+b细胞(cd5+cd19+)的百分率均高于对照组,两者有显著差别,p均<0.05,但achrab阳性和achrab阴性mg组相比较,无统计学差别;全t细胞(cd5+)、全b细胞(cd19+)、传统b细胞(cd5-cd19+)的百分率在两组间无显著差别(见表2)
